什么因素影响共焦显微镜的价格

了解你的共焦显微系统报价

在本文中,我们讨论的关键配置因素影响价格共焦显微系统。许多因素影响共焦显微系统的价格和购买显微镜时,人们必须考虑设备的复杂性和它所提供的功能。显然越复杂共焦,旋转的磁盘,宽视野或TIRF系统配置,系统的相关的成本就越高。很多选择是对潜在买家:选择多个成像模式,高度敏感的探测器,同时多色成像和多峰性。

在本文中,我们概述底层硬件的共焦显微镜和可能选择在决定在共焦显微镜系统适合于您的应用程序。我们将开始通过解构旋转磁盘共焦系统,将简要讨论系统与其他成像方式等超分辨率,TIRF。除了硬件成本、软件影响总成本的共焦显微镜,包括哪些选项包含在基本的软件包,并扩展软件选项。此外,长期维护和系统维修成本也应该因素来最终决定在你所选择的共焦显微镜系统。

总的来说,我们提供一个广泛的硬件、软件和维护选项将买方在决定系统适合于您的应用程序。bob综合app官网登录希望我们将为读者提供一些清晰为什么共焦显微系统证明他们的成本。

图1 -和或的示意图蜻蜓旋转磁盘系统连接到一个数字化的显微镜。

请使用下面的表格来导航的部分利息共焦显微镜配置和组件的影响会影响成本。

共焦显微镜价格因素的影响

点击下面的关键配置因素导航和了解更多关于显微镜的成本上的影响。

显微镜价格因素1 -针孔(旋转磁盘)

选项	评论
单一的针孔	针孔丢弃了聚焦光: 40µm针孔是理想的高放大倍数(63 x 100)。 25µm针孔是低的放大显示。 双针孔显微镜将提供更多多才多艺但会更贵。
双针孔

额外的注意:旋转磁盘共焦针孔的选择相关的从这种类型的设备固定针孔大小(s)。点扫描共焦显微镜,针孔选择购买设备时并不是一个问题。

图2:瀑样的形象。图像获取与蜻蜓旋转磁盘共焦系统使用25嗯针孔。图片由卢克•鲍博士MRC人类遗传学,IGMM,爱丁堡大学。

显微镜放大2 -额外的价格因素

选项	评论
是/否?	额外的放大在镜头面前端口允许收购奈奎斯特准则下相机的像素大小大于6.5µm。更大的像素大小收集更多的光线,但不会满足奈奎斯特在较低的放大。额外的放大可能可以通过固定或电动镜头(允许切换)。收购在奈奎斯特或严格的奈奎斯特准则是一个反褶积的基本需求和超分辨率显微术(参见要求15)。 不同的额外的放大显微镜公司提供不同的选项可用于结合摄像机在奈奎斯特条件下获得。

3 -二向色显微镜价格因素

选项	评论
单/双	可以单个或多个带通二向色性。多个带通二向色允许同时多色成像。 带通二向色如果使用双摄像机采集模式是有用的。 使用不同的二向色性是可能的,并将收购的灵活性。电动或手动双色开关也是一个选择。蜻蜓旋转磁盘系统支持4二向色性,通过电动开关可互换。
三/四
带通

显微镜价格因素4 -排放过滤器

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有多少?	多个带通排放过滤器将允许更快的多色成像,但如果过滤器和不是很准确地选择使用的荧光染料,由此产生的图像之间可能存在渗滤通道。 单带通排放明显减少出血的可能性通过过滤器。 排放过滤器选择的数量将直接影响渠道可以获得数量多色成像实验。
单带通
多个带通

图3 -排放过滤器带通的例子。单个或多个带通滤波器可用于获取多色图像。

5 -激光器显微镜价格因素

选项	评论
多个激光线源	有多少激光可以单位适应吗?4激光,8激光? 是什么支持的激光波长激光器的范围? 激光功率支持是什么?

6 -激光显微镜价格因素

选项	评论
激光多少?	激光的数量以及他们的波长将直接影响渠道的数量是可能的收购,以及实验设计。 使用激光单元,可以容纳近红外(NIR)波长(> 650海里),可以提供实验的优势。近红外激光允许更深的样本渗透和自近红外激光能量用于活体成像实验。 单模光纤提供了一个有效的点光源衍射极限点扫描。然而,单模光纤不会有效夫妇或传输波长更长。相反,蜻蜓的多模光纤结合专利照明系统,北欧化工™可以支持波长的激发和探测范围400 - 800和425 - 850海里。 更高的激光权力可能需要为特定的应用,如超分辨率(风暴)或激光烧蚀实验。bob综合app官网登录 特定的实验需求会影响类型,数量,激光波长和权力。因此,激光的选择最终将直接影响系统的复杂性和成本。
单模或多模撒谎者?
所需的激光功率是什么?

图4 -集成的激光引擎。图像显示和或´s集成的激光引擎,支持多达8激光线和适应可见近红外光谱范围内激光在一个单一的单位。

7 -探测器显微镜价格因素

选项	评论
光电倍增管(pmt) &混合探测器	传统点扫描仪利用光电倍增管(PMT)和混合探测器,而多点共焦使用基于成像探测器。但最主要的区别是什么PMT和sCMOS或EMCCD探测器技术? 有几个参数用来评估科学检测器的性能。重要参数的考虑是:量子效率(量化宽松政策),暗电流,读取噪声和信号噪声比。 基于相机探测器更敏感和有效比PMT和混合探测器捕获光子。PMT和混合探测器的量子效率是45%的最大而sCMOS的量子效率和EMCCDs一般平均80至95%以上。暗电流也低EMCCDs sCMOS探测器相比,pmt: EMCCDs (< e (0.001 -), sCMOS (< 1 e -)和pmt(约2 e -)。 pmt引入市场时,他们明显的领先者探测器,因为他们没有读过噪音。然而,目前,与现代相机技术,读取EMCCDs和sCMOS探测器噪声很低;< 1 e -有效阅读EMCCDs噪音可能使用“EM获得”,和大约1.1到1.6 e - sCMOS模型。整体基于成像探测器(EMCCDs和sCMOS)提供更大的敏感性比pmt和混合探测器。
相机(sCMOS和EMCCDs)

额外的注意:

量子效率(QE)- - - - - -探测器的能力,有效地将光子转换成电子。量化宽松政策越高,越敏感的探测器(e。g 50%量化宽松意味着一半的光子转换成电子)

暗电流——产生的噪声的测量,传感器本身没有任何信号,表示为电子(e -) /像素/秒。

值越低越好对于任何给定的设备。因为它增加随着时间的推移,它变得更加重要,因为曝光时间延长。相机冷却可以用来降低暗电流。冷却的形式可能是空气冷却,水冷(请参见下面的note)

读噪音——读噪音创建相机电子将电子从模拟转换成数字信号,信号放大。值越低越好,因为这集相机的噪声地板,因此检测感兴趣的信号的能力。

冷却——如前所述,冷却相机传感器降低暗电流。冷却可能被动(依赖于交换的热量从相机身体周围的空气),或使用风扇气冷允许改善冷却。水的冷却提供了最深的可能的冷却和一些相机模型是一种选择。水冷却的另外的好处是,它消除了使用风扇,可以作为振动源。(重要的振动敏感测量如高帧率高倍镜下,或本地化显微镜,因为振动影响图像数据)。冷却也会降低“热”的可能性或高噪声像素,可能影响图像尤其是图像栈或3 d卷。

图5的形象EMCCD iXon超888和Sona 4.2 b - 6 sCMOS。

显微镜8 -相机价格因素

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sCMOS	sCMOS EMCCDs有相对的优点和缺点不同的实验要求。sCMOS传感器有一个传感器架构,允许更快的速度和图像采集以更大的视野,从而提高实验吞吐量和生产力。一些sCMOS探测器有一个6.5µm像素大小适合收购尼奎斯特条件下典型的放大;这些相机也允许超高速成像。因此,sCMOS非常适合最常见的成像应用。bob综合app官网登录 EMCCDs有优越的敏感性和仍然是最佳选择非常微弱的信号或低光成像条件。此外,由于非常低的暗电流深度冷却EMCCD照相机,他们更适合长时间曝光的应用程序,例如发光研究。bob综合app官网登录 目前,许多旋转磁盘共焦系统可以容纳两个摄像头。如果,当采购系统不需要两个摄像头,当一个可能选择一个系统,稍后可以容纳第二个相机。通过这样做,会有一定的自由,以适应未来的实验需求。有两个相机共焦系统将允许更大的灵活性,速度,同时多色的收购。 实验设置示例 EMCCD安装系统和一个sCMOS相机sCMOS像素大小可以被匹配EMCCD和两个摄像机之间的芯片尺寸匹配,将允许同时双彩色成像。(E。g与13µm EMCCD相机像素匹配6.5µm sCMOS相机的像素使用2 x2装箱时)。此外,该系统还将提供并发的好处大视场和较小的像素大小sCMOS和非常低的优势与EMCCD光成像。 最终相机产品规格的数量将正确地对显微镜系统的总成本的影响。记住,摄像技术的改进,允许模块化升级加班;搬到最新的探测器技术可以显著提高系统的成像性能。
EMCCD
多个摄像头

图6 -哺乳动物细胞的细胞骨架。图像获取与蜻蜓旋转磁盘共焦显微镜使用888年iXon EMCCD相机。图片由郝回族温家宝(孙玉杰博士实验室),北京大学。

9 -显微镜显微镜价格因素

选项	评论
品牌	有几个选项显微镜站;第一个选择是买什么牌子。不同的品牌提供不同的选项。一个关键考虑,那经常被忽视,就是人体工程学;随着用户花费无数个小时的显微镜获取和装配系统时,用户的舒适不应该被忽视。考虑这方面是有价值的,因为它会影响健康,最终,生产力。 重要的问题需要考虑包括: 直立或倒? 显微镜站有多少港口?有多少外部设备连接到显微镜站吗?(例如,除了附加共焦系统,光刺激是一个要求吗?) 回答1)直立或倒吗? 之间的第一选择将一个直立或倒置的立场。选择直立或反向将取决于类型的实验。例如,电生理学实验和intra-vital实验如住血管成像通常需要一个正直的显微镜。相比之下,哺乳动物live-cell成像通常是使用一个倒置的执行。用户需要考虑的性质实验执行,选择类型的显微镜更适合执行那些实验。 回答2)显微镜站有多少港口? 有要求附加其他显微镜成像/光学设备?有光刺激设备要求吗?未来有要求其他光学组件添加到系统?假设用户计划增加(购买或在将来时)其他光学组件的显微镜。在这种情况下,购买显微镜站时,应该选择一个双层显微镜。通过选择双层显微镜站(即使付出一点获取设备)时,用户会选择未来的应用程序。bob综合app官网登录使用双层显微镜结合光刺激设备将为样本可视化提供更好的用户体验。另一个可能性是附加一个摄像头,允许额外成像应用,如结合生物发光和荧光成像。bob综合app官网登录
正直/倒

图7- - - - - -在斑马鱼幼虫神经系统。图像获取与蜻蜓旋转磁盘显微镜使用一个倒置显微镜的立场。同时采集两个Zyla sCMOS相机、带通二向色25嗯针孔和单带通排放过滤器。图片由露丝Diez del畜栏和大卫。Accardi, Champalimaud中心不明。

10 -镜台显微镜价格因素

选项	评论
手动/电动	选择站后,显微镜下阶段是一个关键因素。舞台需要电动吗?由于机动阶段将增加设备的价格,包括一个机动阶段的优势是什么?机动阶段将提高生产率,允许多个瓦片的收购与一点击,XYZ;这是一个明智的选择。它还促进了大面积、多领域、蒙太奇成像对于大样本和已婚的组织。 其他选项相关的阶段选择和XYZ包括piezo-based阶段。再次,压电控制阶段将增加价格,但提供重要的优势,可能需要对某些实验设置。 压电阶段提供好处时非常平滑运动与纳米和事实上对3 d成像。他们也擅长步骤和解决时间,以及快速扫描。因此,压电控制阶段可能是一个不错的选择,如果用户需要快速的采集速度和精度高的运动。
XYZ精度(压电)

11 -显微镜显微镜价格因素的目标

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放大	显微镜的客观是一个重要的组成部分,应该明智地选择所需的应用程序。bob综合app官网登录自己选择的目标是一个巨大的任务,由于大量的在每个放大选项可供选择。最初,用户开始选择显微镜将有多少目标,和期望的放大。 客观的数值孔径是捕捉光线,更广泛的光锥将高分辨率显微镜。在这一点上的主要问题是:需要解决什么?高端应用,如dSTbob综合app官网登录ORM或全内反射显微镜(TIRF)将需要目标与极高的NAs (> 1, 4)。高钠目标是昂贵的。 另一个考虑是工作距离的目标,这是一个特定于应用程序的需求。例如,长工作距离目标的基础: 想象一些开发流程。 当额外的设备是必要的(如微喷射针)方便进入样本。 工作距离越高,越低NA。 浸没式媒体客观也是一个重要的点。最大化的收集光线,避免衍射,浸没式媒体的目标应该有一个折射率尽可能浸没式媒体的样本。常用的浸媒体空气、油、水、硅和甘油。通常空气目标更便宜、浸目标更昂贵。 当选择一个目标荧光成像技术是至关重要的要记住,并不是所有的目标将在所有波长传输同样。实验涉及近红外光谱和紫外波长应该被给予特别的关注,当考虑的光学系统。如果想DAPI形象,必须有一个目标,在紫外范围内传送。相反,当成像近红外光谱波长,考虑必须采取确保客观的传播在这些波长。 有许多畸变引起的光通过修正的玻璃在不同目标;修正意味着不同价格不同。目标可以是: 消色差透镜或Plan-Achromat, 萤石、Plan-Fluorite Apo-Chromat Plan-Apo-Chromat。 消色差透镜是最简单的用更少的修正目标,而Plan-Apochromat提供更多修正的目标是更多的波长。在目标领域曲率修正,球面像差和色差。 计划意味着场曲率的目的是纠正。场曲率变形影响适当的重点对象的平面,因此严重影响图像的质量。当预算允许,曲率修正(计划)目标是一个关键的选择。 在球面像差,物镜的光线受到扭曲的边缘(弯曲),他们不会集中在同一个平面上的光线穿过的中心目标,造成图像模糊。消色差透镜目标正确的球面像差1波长,萤石为2 - 3,计划3 - 4高度消色透镜。 色差是集中所有波长在同一平面上。消色差目标提供2波长校正,萤石2 - 3,Plan-Apochromat 4 - 5个波长。 最后,一个必须考虑的客观支持技术,因为并不是所有的目标支持所有成像模式。成像模式可用BF-brightfield, DF-Dark领域,Ph值相衬,DIC——微分干涉之下,波尔,两极分化,Fl -荧光。请记住一个目标可以支持多个成像模式。 总的来说,每个目标的最终成本将取决于上面描述的所有参数的组合。通常可以节省的钱如果选择显微镜站已经有可用兼容的目标。(参见要求9 -显微镜站)。
数值孔径
工作距离
浸
透光率
修正

视频1 -小鼠海马扩大样本捕获和或蜻蜓呈现在伊万里瓷器。视频中研究人员利用大蜻蜓视场和北欧化工高度均匀的照明。结果交付一个完美缝合小鼠海马电影细节在脑细胞可以清晰的可视化。由詹妮弗Santini,加州大学圣地亚哥分校医学院的显微镜的核心设备

12 -透射光显微镜的价格因素

选项	评论
Brightfield	透射光的技术可能会感兴趣的用户。目前使用的是覆盖在共焦荧光图像提供一个概览的细胞和组织的形状。 Brightfield更复杂光学(因此更便宜),但许多细胞和组织通过该技术几乎看不见。 相衬显微镜将增加透射光图像的可见性,仍有很多图像与一个分散注意力的阶段会出现光环。 迪拜国际资本(微分干涉对比)的透射光技术提供了更高的分辨率和对比度。DIC光学是复杂和更昂贵的比上面的选项。 几个组件需要购买考虑透射光的技术选择,如相位板环,偏振器,具体目标匹配的透射光技术被使用。
相衬
迪拜国际资本(微分干涉对比)

13 -孵化室显微镜价格因素

选项	评论
前阶段孵化器	如果住成像是一个至关重要的应用程序,那么一个孵化室也是一个重要的要求,有大量的选项可供选择。 当决定考虑应用程序,以及系统的其他选择:舞台,显微镜,显微镜下注射设备等,其目的应该bob综合app官网登录是让共焦系统完全集成系统中每个组件的选择适合所需的应用程序和功能适当地在一起。 用户可以选择:1)一个舞台前孵化器,孵化2)底部阶段,匹配不同的幻灯片或培养皿在实验室中使用,或者,3)一个大孵化器热身的所有系统。最后的选择是一个大型的结合孵化器热身的所有系统和加热样品持有人更高的精度。 关键方面考虑: 温度范围和精度 温度随时间的稳定性 实现的可能性较低温度(即。孵化器可以冷却)。 当选择孵化器的阶段,应该是透明和显微镜工作时允许更多的安慰吗?或黑色,以避免不必要的光成像系统?非常重要的是,舞台孵化器可以结合二氧化碳培养箱吗?二氧化碳是一个实验的基本需求吗? 总的来说,选项添加到孵化器越多,越贵,至于这样一个孵化器,也允许二氧化碳控制会更昂贵的比孵化器仅控制温度。
下阶段孵化器
大舞台孵化器

视频2- - - - - -体内成像小鼠肠道的血流量。图像获取与和或蜻蜓200帧每秒的使用和或sCMOS相机。现场组织与孵化器维持在37ºC。样品由孝宏博士Kuchimaru。(有望医科大学、日本)。

表14 -显微镜显微镜价格因素

选项	评论
刚性	严格的表没有提供对振动隔离,尽管如果建设足够强大,他们可以交付到1µm决议。越敏感的应用程序,更重要的是有一个适当的站在表系统。提供完美的形象,一个表应该吸收振动引起的周围的环境。某些应用程序这样bob综合app官网登录的风暴,SRRF-stream和TIRF只能使用一个减振表执行。防振表也是非常有用的应用程序,如时间流逝成像,大型瓷砖成像,在匹配连续帧移动,或获得的瓷砖是至关重要的。bob综合app官网登录再次,价格根据不同表选择,例如,根据隔振表可以提供。
被动
活跃的

注意:一般来说,表提供的决议:

• 刚性- 1µm
• 被动:µm下降到0.01
• 活跃——µm下降到0.001

请注意,这些数字表明,当采购设备确保表所需的收购提供必要的隔振实验。

图8- - - - - -斑马鱼与乙酰化微管蛋白染色。图像获取与蜻蜓旋转磁盘显微镜使用舒鼾4.2 b6 sCMOS相机。图片由Marco Campinho阿尔加维大学做。

15 -其他光源显微镜价格因素

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领导	在共焦系统,选择样品的成像区域通常是做视觉通过目镜,因此用户不能使用激光光源,替代选项包括金属卤化物灯,氙气灯泡或LED光源。 目前LED光源很好令人兴奋的样品所需的波长,有额外的优势,LED灯提供低能量光源,从而降低光漂白,光毒性筛选时尽管示例。LED光源有长期的时间和成本相对较低。由于这些原因他们都但取代金属卤素灯和氙气光源。 所需的波长数量也是很重要的考虑。它可能是重要的系统中有多个行领导,因此,可用波长越多,光源将更加昂贵。
金属卤素灯
氙

16 -超分辨率显微镜价格因素

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SIM卡	有许多不同的超分辨率技术提供了更高的分辨率,使用变量激光强度、光学和计算机实现提高分辨率的方法。一般来说,成像所需的激光功率越高,越不兼容的技术与生活cell-super决议。这里我们讨论一系列超分辨率技术和他们是多么简单集成在显微镜系统。更复杂的技术来实现那么很可能相关的成本会更高。 SIM提供分辨率100海里,兼容宽视野显微镜,live-cell成像。SIM卡适用于任何荧光团,可以达到加速1帧/秒。然而,SIM需要专门的光学组件和提供更多的整体能力比传统的宽视野方法示例。SIM卡需要一个专门的显微镜,而不是通常提供一个多通道共焦系统。 、提供决议范围内的40 -50海里。发生的是复杂而昂贵的光学和可能不是对所有实验室访问。在发生,super-resolved形象立即交付在收购和不需要任何计算图像分析。、需要一个专门的显微镜,而不是通常提供一个多通道共焦系统。 单分子本地化显微镜(SMLM)技术,如风暴/ dSTORM和棕榈依赖光敏化选择的分子来确定自己的位置。通过重复少数分子的激发103到104倍,super-resolved形象。风暴需要很高的计算能力来分析图像,但另一方面,不需要特殊的光学,呈现较低的预算选择相比、或SIM卡。SMLM技术要求更高的激光的权力,因此不兼容live-cell成像。风暴是一种宽视野技术,也可以结合TIRF照明。SMLM技术(风暴和PALM)提供最高分辨率的超分辨率技术实现横向10纳米。 SRRF(超分辨率径向波动),和或SRRF-Stream +兼容live-cell成像。SRRF-stream +是一种低成本的基于成像方法来实现超分辨率和横向分辨率提供100海里。更高的分辨率可能取决于成像条件。它不需要复杂的样品制备和可以提供super-resolved图像深处的细胞和组织。解决SRRF-Stream +的改善是通过使用SIM比得上,然而SRRF-Stream +提供了一个简单的基于摄像头更实惠的机制来实现提高分辨率为现有系统,摄像机可以被交换出去,或植入一个新的系统。
发生的
风暴
SRRF-Stream +

注意:更多信息,请参见当今世界上最受欢迎的显微技术。

图9- - - - - -双酚a细胞沾phalloidin(红色),mitotracker(绿色)和DAPI(蓝色)在共焦成像Ixon 888超模式(没有SRRF)和共焦模式SRRF-stream +。图像获取与蜻蜓旋转磁盘显微镜使用Ixon 888 EMCCD相机。图像由克劳迪娅Florindo、和或牛津仪器公司,英国贝尔法斯特bob平台下载手机版

17 - 3 d-storm显微镜价格因素

选项	评论
散光镜片	如果用户需要最大分辨率由dSTORM,然后考虑设备能够提供3 d super-resolved图像。一种优雅的方式3 d-dstorm图片是使用PSF散光镜片引起失真。PSF失真编码一个微分积极和消极在X和Y轴向偏移量尺寸,可以翻译成一个轴向位置,允许创建一个3 d super-resolved形象。和或蜻蜓有一个集成散光镜片选项,可以用它来获取3 d-dstorm图像。应该决定购买的时候如果3 d-storm是必需的。然而,这个选项是升级后购买,但该系统将需要返回给工厂增加成本,导致实验时间和生产力的损失。

额外的注意:PSF -点扩散函数的响应是一个成像系统(e。g显微镜)一个点对象。当光通过一个光学系统(镜头和其他成像组件)扭曲是由于系统的光学组件的属性。这种扭曲的PSF是衡量。

一个无限小的点不会出现作为一个点的图像模糊。由此产生的图像是复杂的。由于PSF是相同的在所有的成像空间(例如,在所有的对象成像)恢复可以使用模糊数学过程,这个过程叫反褶积。反褶积将有效地消除“雾”的形象揭示了真正的对象更清晰。

18岁TIRF显微镜价格因素

选项	评论
单一的颜色	TIRF显微镜(全内反射显微镜)允许用户获得非常详细的图像对象的接近样品表面。TIRF显微镜与障碍是建立光路的方式将迫使光达到TIRF下滑角的边缘。这种类型的照明的结果之一是,图片只能获得在一个非常薄的玻璃/水界面之间的边界。TIRF将允许成像的最大100 - 200 nm的样本。此外,TIRF系统提供的高分辨率使其用于单分子成像;因此,可以结合dSTORM收购TIRF成像。 TIRF是理想的解决方案,分析活细胞在细胞膜边界事件如:膜动力学、泡走私、内吞作用、胞外分泌和任何其他事件在细胞表面。 如果TIRF要求,考虑选项,包括: 单一的颜色 Dual-colour同时TIRF 可以穿透深度角可以纠正软件? 双重色彩TIRF可以用不同波长调整渗透的角度吗? 预算明智的专用TIRF系统将比一个便宜多通道共焦系统,当然仅限于TIRF成像。然而,如果需要TIRF的多通道共焦系统和或蜻蜓有利地包括集成TIRF功能。
同时双颜色

视频3 -粘附蛋白可视化TIRF显微镜使用和或蜻蜓。在肝癌DLC-1(删除)绿色和美丽的红色所示。图片由丽贝卡·凯利,综合生物学研究所和CCI(细胞成像中心),英国。

显微镜价格因素19 -多通道系统

选项	评论
多通道	一个多通道系统提供高质量的图像在所有形式是最多才多艺的选择研究实验室以及核心设施。核心设备的成像需求巨大;多通道系统将提供几个成像选项在多个不同的成像项目并行地运行。 在研究实验室,至关重要的是要记住,作为研究成果和发现进步,可能需要额外的成像方法。在这种情况下,一个多通道系统将提供额外的多功能性而不需要购买额外的设备。 宽视野系统可以非常快速和温和的样本,因此实时成像是一个很好的选择。然而,宽视野系统不提供光学切片,出于这个原因,厚和高度散射样品不合适。宽视野可以用于成功live-cell薄生物体或薄固定细胞的成像。因此样品如细菌、酵母、微藻和单层细胞在宽视野的形象都是不错的选择。 一个共焦系统是一个显微镜,可以执行使用针孔丢弃失焦光光学切片。有两个类型的共焦显微镜: 点扫描共聚焦,聚焦光一个针孔丢弃。 多点共焦(旋转磁盘),多个小孔丢弃失焦的光。 单点共焦图像可以深入样本,而是因为他们逐点扫描,大大低于多点共焦。点扫描共焦的另一个缺点相比,旋转磁盘是捕捉光t的整体效率较低,导致需要使用更高的激光权力想象样品。更高的激光权力会导致更多样本光漂白,活体成像实验的情况下,导致更多的光毒性和photodamage。 传统的多点共焦图像不能深入样品由于针孔相声。和或的蜻蜓最优针孔井距设计,因此允许成像深度毫米厚样本。蜻蜓有非常有效的生活样本和样本照明是外邦人在共焦成像模式可以提供400帧每秒的速度一样快。 TIRF成像,是一种专门的显微镜技术针对图像live-cell-surface事件或细胞/衬底附件交互。更多信息关于TIRF阅读要求17。请注意,需要专门的光学组件允许TIRF成像和包含在构建系统。如果一个系统没有TIRF光学组件构建到它从一开始就将极其复杂和昂贵的追溯包括TIRF功能。 超分辨率想象的能力小于200纳米结构,可以在许多生物项目至关重要。有几个选项的超分辨率的优点和缺点,又有一个以上的超分辨率选项将提供多功能性。关于超分辨率的更多信息阅读需求15和16。 总的来说,一个系统可以结合宽视野,共焦,TIRF和超分辨率能力提供可靠的多通道成像,将是一个梦想的系统。和或蜻蜓是这样一个系统,提供杰出的质量和高速度在任何成像形态:宽视野,共焦,TIRF和超分辨率选项(dSTORM & SRRF-Stream +)。在考虑所有的成像技术结合在一个系统中,蜻蜓是一个很好的成本效益的选择。
宽视野
共焦
TIRF
超分辨率

图10 -成年斑马鱼大脑和脉管系统,Multi-tile图像获得500和或蜻蜓和使用双摄像机同步采集。多个瓦片,缝合和反褶积进行图像采集。图片由朱利安Resseguier在NorMIC(奥斯陆大学)。

显微镜20 -软件收购价格因素

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图像采集方案	当获得一个系统时,必须考虑收购软件为例,可以用所需的软件集成成像模式和应用程序?bob综合app官网登录什么是软件的基本方案,额外的模块是什么?为您的应用程序需要哪些额外的模块需求?和额外的模块多少钱? 大多数共焦系统的基本软件包通常包括功能Z堆栈、延时、多点、多通道实验和6 d实验(3通道、时间、多通道采集不同渠道,时间,和Z)。然而,有更多的选择,可以包含在显微镜采集软件,和这些特性可以标准。举几例:瓷砖/马赛克成像,2 d和3 d缝合,反褶积,实时缝合,实时反褶积、多井集成等。 的关键因素是确保软件是强大到足以允许应用程序的用户的需求。bob综合app官网登录进一步的灵活性,允许脚本和集成的软件与外部设备通过脚本后可能出现的新应用程序将确保灵活性的时间购买。bob综合app官网登录

21 -软件分析显微镜价格因素

选项

评论

图像分析选项

至于软件,不仅收购选项也可视化和分析工具是重要的。理想情况下,系统应该集成的方式收购软件和分析软件可以相互通信,以创建一个有效的和高效的工作流程。分析包应该包含工具提供统计数据分析实验所需的问题。这样的例子有工具来分析细胞内的距离,细胞内的斑点(细胞器),细胞跟踪(3 d和2 d),脊椎神经分支和密度、细胞周期等。 反褶积的选择是必须的,如果没有包含在采购软件,那么它应该被纳入分析包。反褶积是为何如此重要?显微图像是由一个光学扭曲过程固有的光子的行为方式,通过玻璃。一个无限小的点不会显示自己是一个点在一个图像,但它会有色散特性的光学系统。有一些方法可以减少有意义的模糊,一个非常有效的方法是使用共焦。然而,总是会有一些卷积,因此有一个形象,真正代表了对象,应该deconvolved原始数据。 如果使用一个大型生物或连续样本中获得多个成像瓷砖,然后再考虑一个订书机作为额外模块分析包。钉箱机应该迅速和有效地连接所有的瓷砖成像在一起,允许一些瓷砖提供连续图像之间的重叠部分。钉箱机应该能够处理大数据集。用户应该确保订书机可以渲染所需的数据集的大小。 如果要做重复的分析,然后批量分析功能是重要的考虑,所以,一旦分析参数定义,可以批量自动化分析。 总之,分析和渲染软件应该提供的统计数据也显示数据最好的方式,提供多个呈现和数据可视化模式,这样的数据可以很容易地和明确显示结果。总的来说,作为一个经验法则模块越多,越昂贵的分析模块。然而,认为当购买一个优秀的图像分析软件,额外的价格可以恢复时间和优越的输出数据质量分析。

图11 -哺乳动物细胞呈现肌动蛋白、线粒体和DNA。图像获取和或蜻蜓500 iXon 88相机,使用SRRF-Stream +成像方法。图像处理伊万里瓷器9.7。肌动蛋白丝(黄色)和表面分割组件。图像由克劳迪娅Florindo、和或牛津仪器公司,英国贝尔法斯特bob平台下载手机版

额外的显微镜价格因素——维护包

选项	评论
基本覆盖	现在共焦显微镜就像一个管弦乐队的小提琴:高端的设备,提供特殊的质量。然而,所有的高端设备都需要整合,不断提供质量标准设置的时候购买;出于这个原因,尖端仪器的定期维护是必须的。 当购买显微镜,通常包含在购买协议保证。买方可以选择购买一个扩展维护包立即确保设备将整合其最大在第一年的使用。 在最初的保修耗尽之后,显微镜公司提供维修方案,为简单起见包可分为3种类型:基本、中、全覆盖。 基本包通常包括一个预定义的网站访问人数(诊断和解决问题)和预防性维护访问,但没有替换零件。 中包包括基本包加上一些设备零件的更换(在许多情况下不包括激光更换)。完全覆盖包通常是最昂贵的,但另一方面是确保优质出席,无限的插图的编号来解决问题。全面维护覆盖所有替换、旅游、咨询费用,公司可以确保一个完整的和优先级考勤给用户。 当预算允许一个完整的覆盖,这是一个“不头痛的”解决方案。 有维护包,提供远程诊断将节省时间和加快支持过程。“时间就是金钱”考虑选择一个支持合同,提供远程诊断、可靠和高质量的支持。
媒体报道
完全覆盖

图12 -整体比较价格和维修方案的报道。