MicroPoint提供了一种灵活的、经过现场验证的光刺激技术工具,如漂白、消融和解封。MicroPoint脉冲光刺激系统使用氮(N2)脉冲激光(337 nm)泵浦腔谐振腔包含仔细滴定的荧光分子溶液。该腔是强调谐染料增益特性,并作为一个低Q谐振腔,不强烈影响波长。溶液的化学性质决定了染料激光波长的精度为±1 nm,带宽为2-3 nm FWHM。MicroPoint染料激光器的输出脉冲持续时间约为< 4 ns,由N2泵浦激光器设定。435 nm染料激光器的最大能量通常为40 uJ,这作为所有其他波长的能量参考,如表1所示。提供给样品的能量会根据显微镜的光学特性发生显著变化。当工作在400纳米以下时,必须仔细选择光学显微镜。
染料ID | 中心(+-)波长(nm) | 效率% vs 435 nm |
27 - 365 | 364 | 66 |
27 - 388 | 388 | 46 |
27 - 390 | 390 | 60 |
27 - 404 | 404 | 38 |
27 - 419 | 419 | 40 |
27 - 422 | 422 | 60 |
27 - 435 | 435 | One hundred. |
27 - 471 | 471 | 70 |
27 - 481 | 481 | 64 |
27 - 514 | 514 | 50 |
27 - 521 | 521 | 76 |
27 - 539 | 539 | 70 |
27 - 543 | 543 | 30. |
27 - 551 | 551 | 84 |
27 - 576 | 576 | 54 |
27 - 582 | 582 | 69 |
27 - 590 | 590 | 73 |
27 - 593 | 593 | 52 |
27 - 613 | 613 | 42 |
27 - 622 | 622 | 56 |
27 - 626 | 626 | 71 |
27 - 651 | 651 | 52 |
27 - 656 | 656 | 52 |
表1 MicroPoint Dye激光器的ID和波长精度为+- 1 nm,每条线的带宽为2-3 nm,取决于中心波长。
通过从列表中选择合适的Dye ID,可以在设备中支持24个离散波长,如表1所示。我们建议为每种染料混合物配备一个单独的谐振器,以避免污染、效率损失和/或波长偏移。虽然这些染料可以用在固态(如凝胶或塑料)中,但液态染料的优点是,在激发过程中漂白的分子可以迅速被扩散取代,而老化只是缓慢的。在正常使用情况下,一种染料电池溶液通常可以持续几个月。这种染料很容易更换,并可从安铎公司获得方便的预混合等分。染料激光器的最大重复频率是每秒20脉冲(pps)。这受到N2泵浦和染料扩散到激光焦距体积的速率的限制。
图1染料激光器由左至右:染料腔谐振器、染料腔块和N2耦合光纤。
采用紫外传输光纤耦合N2泵浦激光器和染料激光器。在图1中,光纤被突出显示在染料槽块的右手边。染料池谐振器安装在块内(图1中箭头所示)并固定。这样组装的染料激光器由聚焦的337 nm脉冲泵浦,使选定的染料波长作为近平行光束发射。染料激光束被扩展并通过导向光学送入显微镜,聚焦后,它在样品平面上呈现出接近衍射极限的光斑。
其中两个染料电池谐振器的发射波长分别为365和435 nm,而第三种“ALL”类型用于所有其他波长。
该染料池可根据用户的光刺激要求进行切换,因此提供了一种非常灵活的工具。在高能时,MicroPoint可以用于烧蚀和切割/标记,而在低功率时,它用于解冻、漂白和局部激活应用。bob综合app官网登录能量是由一个机动中性密度过滤器在三十年(数量级)范围内调制的。重要的是,该设备可以适应于所有主要制造商的广泛的垂直和倒置显微镜。这种灵活性、波长范围、能量和配置的便利性确保了MicroPoint在生命科学以及工业标记应用中得到广泛的应用。bob综合app官网登录
MicroPoint的手动变体有一个固定的光束传输系统,手动定心和聚焦。在这种模式下,通过XY平台定位感兴趣的样品区域,并聚焦在触发时入射光束将投射的位置。脚踏板,鼠标或程序触发是可用的。
图2微点式电流计模型:电动衰减器显示在染料槽块前面。
MicroPoint的电流计版本允许焦点在大约7 x 7毫米的视场范围内被引导,当参照主成像平面时。这相当于一个面积略大于中央象限的安多尔相机,包括iXon Ultra 888, Sona 4B6和或Zyla 4.2 plus。电流计的运动可以与激光脉冲同步,以允许对区域或边界进行光刺激,或对移动特征进行交互跟踪。
有关更多信息,请参见:http://www.andor.com/microscopy-systems/photostimulation/micropoint?gclid=CMiQtLb_mtQCFRY9gQodqIIF9Q
图3染料27-590微点的典型发射光谱,显示了高斯分布和染料填充腔的典型2nm带宽。
图4所有染料激光波长的相对能量图,参考435 nm发射。
氮气(N2)泵浦激光器提供3.5 ns脉冲337 nm (UV),重复频率高达20 Hz。脉冲能量为170µJ,峰值功率为45 kW,平均功率为3 mW。触发可以在内部或外部控制速率高达20赫兹。N2激光器使用可更换的,密封的激光墨盒,其中包括高压存储电容器,开关元件和激光管。该墨盒保证在2000万脉冲或一年时间内至少保持70%的能量,以先发生的为准。不需要对镜子进行校准,因为激光光学装置安装在等离子管上,并在工厂进行校准。N2激光器包括所有必要的安全功能,以符合美国激光安全标准包含在21 CFR 1040.10和IEC 60825-1。
波长337.1海里。光谱带宽0.1 nm。脉冲宽度(FWHM) < 3.5 ns。脉冲能量170µJ。能量稳定性(脉冲对脉冲)3% std. dev. @ 10hz。峰值功率45kw, 20hz时平均功率3mw。
波长365 - 656 nm: 24个波段。光谱带宽2 ~ 3 nm。脉冲宽度(FWHM) < 4ns。
脉冲能量-波长相关- max 12-40µJ。
能量稳定性(脉冲对脉冲)4% std. dev. @ 10hz。峰值功率10 kW,平均功率800µW @ 20 Hz。
重复频率0 ~ 20hz(外部触发),1 ~ 20hz(内部触发)。
外部触发输入TTL(光隔离)。内部触发发生器1 ~ 20 Hz(可调)
电源要求:+24 VDC, 1.5 A(平均)在20hz。, 3 A(峰值)功耗36w (20hz运行)。工作温度< 35°C。内置开/关联锁开关。
尺寸:3.75" × 3.75" × 11" (WHL),(9.5厘米× 9.5厘米× 27.9厘米)。Weight7.5磅。质保:墨盒保证在2000万脉冲或一年的时间内保持至少70%的能量,以先发生的为准。