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彗星试验

彗星图片由Marie Vasquez提供,Helex 3公司。

彗星试验?这不是天文学上的一项技术,通过扫描太阳系内外来评估人类步恐龙后尘的风险!Comet Assay,也被称为“单细胞凝胶电泳”,是一种在单个细胞水平上评估和定量DNA损伤和修复的高度敏感和高效的手段,适用于任何真核细胞。DNA损伤类型包括单/双链断裂、DNA-药物交联、DNA-蛋白质或DNA-DNA交联和氧化性DNA碱基损伤。该技术基于荧光显微镜,包括将核包埋在琼脂糖凝胶中,然后在外加电场下进行电泳分离。DNA用荧光染料染色,随后在荧光显微镜下成像。由此产生的结构让人联想到彗星,由细胞核头部和受损DNA的尾部组成。在电泳过程中,断裂的DNA片段从细胞核中迁移出去,DNA损伤的程度可以通过测量头部和尾部之间的相对DNA %来量化。重要的是,DNA损伤的确切类别可以通过仔细控制细胞制备条件来检测。例如,用于将DNA损伤位点转化为DNA片段(Comet检测必不可少)的碱处理(pH控制)的程度可以区分不同类型的链断裂。 Sites of DNA base modifications can be converted to DNA fragments by introduction of enzymes that act specifically on such lesions. Furthermore, DNA crosslinking and binding can also be detected by the Comet assay, by determining the extent to which these interactions retard migration of DNA. Since its "impact", Comet has become a core technique within fields or study such as toxicology, apoptosis, DNA repair, aging, cell cycle analysis and free radical biology.

彗星载玻片在荧光显微镜下检查,通常使用宽视场荧光显微镜。宽视场epifluorescence显微镜已经发展成为一种普遍可用的技术,用于研究荧光标记的细胞和组织。在过去的几十年里,由于荧光探针、标记化学、光学仪器(如滤光片和物镜)和探测器技术的改进,这一趋势得到了加速。

宽视场技术包括通过波长或小波长范围对视场进行泛光照明(通常使用激励滤波器和弧光灯)。斯托克位移荧光发射通过二向色光传输,最初用于将较短波长的激发光反射到样品上,再次通过发射滤光片(通常称为阻挡滤光片)进行光学过滤,并聚焦到相机探测器上。

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类别:应用注释

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