研究人员使用图像分析更好地了解中心体成熟

通过双胸腺嘧啶阻断使HeLa细胞同步化，并在抗心包凝集素(PCNT)免疫染色和PCNT smFISH前用DMSO载体(对照)、emetine、三尖杉酯碱或嘌呤霉素处理。每个条件的代表性共聚焦图像和PCNT mRNA分布的定量显示。研究人员通过测量三维呈现的PCNT smFISH信号与最近中心体中心之间的距离，量化了PCNT mRNA在细胞中的分布。mRNA的分数作为距离最近的中心体的函数绘制为三个生物重复的平均值(实线)±95% CI(阴影)。注意PCNT mRNA在三尖酯碱或嘌呤霉素处理后离开中心体，但在依米汀处理后保持在中心体附近，与对照相似。戴维斯大学加州大学李恩·何俊。

由加州大学戴维斯分校(University of California, Davis)的焦立恩(Li-En Jao)领导的研究人员正在研究细胞如何在分裂前通过中心体成熟过程快速扩展中心体。当这一过程不能正常工作时，就会导致基因组不稳定和癌症中出现的不受控制的细胞分裂。使用伊万里瓷器软件和andor蜻蜓他们在细胞分裂过程中中心体如何组织微管方面有了新的发现。

中心体是微米级的、无膜的自组装细胞器。在细胞分裂之前，中心体“成熟”，使其微管组织活动达到最大限度，以支持纺锤体微管的组织。

在这项新研究中，研究人员将重点放在蛋白质中心蛋白上，它通过帮助招募其他蛋白质来启动中心体成熟。他们想要了解更多关于细胞如何在几分钟内产生并向中心体传递大量这种蛋白质的信息。

检测弱信号

为了了解有关在细胞中产生的方法和何处，研究人员将单分子RNA合并原位杂交（SMFISH）和抗体染色以检测Pericentrin RNA和新合成的蠕虫蛋白蛋白。RNA和新合成蛋白的共定位揭示了被翻译的精确RNA分子。

研究人员使用Andor Dragonfly System（ANDOR Dragonfly System）将培养的人体细胞中的Pericentrin RNA和蛋白质进行了成像，一种旋转椎间盘共聚焦显微镜，它包含具有高灵敏度摄像机的微透镜共焦扫描仪。“蜻蜓系统提供了高灵敏度和分组来检测弱小的SMFISH信号，”JAO说。“它还使我们能够以高灵敏度和分辨率形象蠕动素mRNA和蛋白质。”

接下来，调查人员使用IMARIS来量化蠕虫素RNA分子如何在单细胞水平上与Centrosomes分布。通过使用IMARIS将蛋白质信号转化为表面和mRNA信号，以在每个共焦Z叠层的去卷发图像中转化为表面和mRNA信号的斑点来通过量化细胞内的3-D RNA分布。然后，它们通过将蛋白质Pericentrin信号的表面放置在原始图像上并在imaris中使用统计功能来定量蛋白质蛋白蛋白强度，以获得拟合体积内的原始图像的强度和。

Pericentrin立即建造并运输

总的来说，图像分析显示，在有丝分裂期间，中心体蛋白被共翻译招募到中心体。这意味着，细胞通过使用RNA分子作为模板来构建蛋白质和核糖体，以正确的顺序组装构建块，从而同时构建和运输中心蛋白。

研究人员计划通过使用蜻蜓系统和iMaris继续这种研究，以了解细胞如何在中心成熟期间招募其他中心蛋白的泌尿细胞与中心蛋白的共转化靶向。

研究人员使用SMFISH和双重免疫荧光（IF）来区分新合成和全长的PERICENTRIN（PCNT）蛋白（A）。（b）Prometaphase Hela细胞接受PCNT SCFISH和抗PCNT免受PCNT蛋白的N-和C-末端的免疫染色。推定的主动转换网站由PCNT N-TERM IF和PCNT SMFISH标记，但不是PCNT C-TOND IF（顶面板）。在嘌呤霉素治疗后，如果信号不再用PCNT SMFISH信号分开信号，则表明那些PCNT n术语如果RNA上的信号代表新生的PCNT多肽。橙色盒子显示出用虚线橙色盒子标记的区域更高的对比。（C-D）将PCNT蛋白和PCNT mRNA信号分别从使用IMaris的共聚焦Z堆叠图像中的“表面”和“点”。（e）PCNT从中心组中心的1至3μm半径之间的信号量为抗PCNT N-术语的存在，如果有或没有短嘌呤霉素处理的信号。戴维斯大学加州大学李恩·何俊。

研究论文:Sepulveda G，Antkowiak M，Brust-Mascher I，Mahe K，Ou T，Castro NM，Christensen Ln，Cheung L，Jiang X，Yoon D，Huang B，Jao Le。2018年，靶向术语靶向促进脊椎动物成熟期间PCNT的Centrosomal募集。Elife。PII：E34959。DOI：10.7554 / ELIFE.34959。